流式細(xì)胞儀怎樣檢測(cè)細(xì)胞的周期

更新時(shí)間：2016-11-28瀏覽：3979次

　　流式細(xì)胞術(shù)，顧名思義，是研究細(xì)胞的一種技術(shù)，但是它的研究對(duì)象不僅僅局限于真核細(xì)胞，還可以研究細(xì)菌、病毒以及各種蛋白等等。無(wú)論你是基礎(chǔ)科研工作者還是臨床醫(yī)生，都用得上這項(xiàng)技術(shù)。與之相關(guān)的儀器----流式細(xì)胞儀。

　　通過(guò)流式細(xì)胞儀可分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡。

　　流式細(xì)胞儀分析原理：通常用PI染細(xì)胞核，PI在一定波長(zhǎng)的光下發(fā)出熒光，其強(qiáng)度與DNA含量成正比。綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白及其它發(fā)光基團(tuán)也可作為標(biāo)記物，分選細(xì)胞。

　　流式細(xì)胞儀測(cè)量方法：

　　1）將細(xì)胞以1×106接種于60mm培養(yǎng)板，80％匯合后轉(zhuǎn)染。

　　2）24小時(shí)后在新鮮培養(yǎng)液中加入適當(dāng)?shù)目股兀ㄕ婧吮磉_(dá)載體上的抗性標(biāo)記）進(jìn)行培養(yǎng)（該步可選）。

　　3）48－72小時(shí)后用胰酶消化收集細(xì)胞，PBS洗兩遍，棄上清，加入1ml 70％預(yù)冷乙醇中，吹打均勻，4℃固定12小時(shí)以上。

　　4）PBS洗滌去乙醇，1000rpm,5min，洗兩遍。

　　5）0.5mlPBS重懸細(xì)胞，加入PI和RNaseA至終濃度50µg/ml，37℃溫浴30 min。

　　6）用流式細(xì)胞儀測(cè)定周期。

　　PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。

　　RNaseA：10mg/ml。